食品中二苯乙烯類陰離子型熒光增白劑的測定

1 范圍
本方法規(guī)定了食用菌、大米、小麥粉和小麥粉制品、淀粉和淀粉制品中11種二苯乙烯類陰離子型熒光增白劑的液相色譜測定方法。11種熒光增白劑包括熒光增白劑24、熒光增白劑71、熒光增白劑85、熒光增白劑90、熒光增白劑113、熒光增白劑210、熒光增白劑220、熒光增白劑264、熒光增白劑353、熒光增白劑357、熒光增白劑5bm。
本方法適用于食用菌、大米、小麥粉和小麥粉制品、淀粉和淀粉制品中11種二苯乙烯類陰離子型熒光增白劑的定量分析。
2 原理
試樣經(jīng)提取、凈化后，采用配有熒光檢測器的液相色譜儀檢測，外標(biāo)法定量。
3 試劑和材料
注：除另有說明，所有試劑均為分析純，試驗用水采用GB/T 6682規(guī)定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1 甲醇（CH4O）：色譜純。
3.1.2 四丁基溴化銨TBA（C16H36BrN）：色譜純。
3.1.3 氨水（NH3·H2O）：濃度25%~28%。
3.1.4 0.1%氨水溶液：吸取0.100 mL氨水（3.1.3），加入100 mL去離子水中，混勻。
3.1.5 提取液：將甲醇（3.1.1）、水和氨水（3.1.3）按照60:39:1體積混勻。
3.1.6 TBA溶液：稱取8.05 g四丁基溴化銨（3.1.2），用水定容到1 L，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，超聲脫氣。
3.2 標(biāo)準(zhǔn)品
11種熒光增白劑標(biāo)準(zhǔn)品的基本信息見表1。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取適量各標(biāo)準(zhǔn)樣品（3.2），用0.1%氨水溶液（3.1.4）配制成濃度為100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，0~4℃避光保存。有效期3個月。
3.3.2 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：吸取適量每種標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.3.1），用提取液（3.1.5）稀釋成1.00 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，避光0~4℃保存。有效期1個月。
3.3.3 混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：吸取適量混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.3.2），用提取液（3.1.5）配成濃度為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，臨用時配制。
4 儀器和設(shè)備
4.1 液相色譜儀：配有熒光檢測器。
4.2 超聲波發(fā)生器。
4.3 渦旋混合器。
4.4 天平：感量分別為0.01 g和0.000 1 g。
4.5 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
4.6 離心機(jī)。
5 分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1 試樣處理
從原始樣品取出有代表性樣品約500 g，用搗碎機(jī)充分搗碎混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。將試樣置于避光保存。
5.1.2 試樣制備
準(zhǔn)確稱取1 g試樣（至0.01 g）置于塑料離心管中，加入提取液（3.1.5）10mL，渦旋震蕩1 min，超聲10 min后，用4 000 r/min離心5 min，取上層清液，0.45μm微孔濾膜過濾后進(jìn)液相色譜儀分析。
5.2 儀器參考條件
5.2.1色譜柱：C18柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或性能相當(dāng)者。
5.2.2流動相：流動相A相為甲醇，B相為TBA溶液（3.1.6），流動相梯度洗脫條件如表2。

5.2.3流速：1.0 mL/min。
5.2.4柱溫：30℃。
5.2.5檢測器：激發(fā)波長350 nm，發(fā)射波長430 nm。
5.2.6進(jìn)樣量：20 μL。
5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.3）分別按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5.4 試樣溶液的測定
將試樣溶液（5.1.2）按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中目標(biāo)物的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次。
6 結(jié)果計算
試樣中目標(biāo)物含量按式（1）計算：

式中：
X—試樣中檢測目標(biāo)物的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中檢測目標(biāo)物的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
V—試樣提取過程中定容體積，單位為毫升（mL）；
m—試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）。
計算結(jié)果以重復(fù)條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
7 精密度
在重復(fù)條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的差值不得超過算術(shù)平均值的10%。
8 其他
當(dāng)稱樣量為1.00 g，定容體積10 mL時，本方法檢出限為0.015 mg/kg，定量限為0.050 mg/kg。

1 ——熒光增白劑220     7 ——熒光增白劑113 
2 ——熒光增白劑24     8 ——熒光增白劑357
3 ——熒光增白劑210     9 ——熒光增白劑5
4 ——熒光增白劑264     10——熒光增白劑90
5 ——熒光增白劑353     11——熒光增白劑71
6 ——熒光增白劑85

本方法負(fù)責(zé)起草單位：北京市食品安全監(jiān)控和風(fēng)險評估中心（北京市食品檢驗所）。
驗證單位：山東省食品藥品檢驗研究院、河北省食品檢驗研究院、國家食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（上海）、北京市理化測試分析中心、北京市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院。
主要起草人：姜潔、羅曉軒、趙麗、潘紅艷、陳江龍、張杉。